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【商品名】パラ結核菌リアルタイム PCR 検出キット
【パッケージ】50 テスト
【表示】パラ結核菌用リアルタイム PCR 検出キットは、鼻腔スワブ、牛乳、関節液サンプル中のパラ結核菌 RNA の検出に適用できます。検査結果は研究のみを目的としており、臨床診断を目的としたものではありません。
【主なコンポーネントと内容】
名前 | 仕様 | 量 |
PMB反応液 | 1000μl/チューブ | 1 |
PMB ポジティブコントロール | 250μl/チューブ | 1 |
ネガティブコントロール | 250μl/チューブ | 1 |
【保管と有効期限】
-20±5℃で保管、冷凍・解凍を3回以内繰り返した場合、賞味期限は12ヶ月です。
【試験方法】
1. 核酸抽出
核酸抽出は市販のRNA抽出キットをご利用いただけますので、キットの説明書に従ってください。
2. PCR 増幅 (ABI 7500 の例、ABI 7300 および LC480 については、この操作およびマニュアルを参照してください。)
2.1 検査サンプルの数を計算し、n+2 PCR 反応チューブを取り出し、2 を追加します。各チューブに 0μl の反応溶液を加えます。
2.2 ネガティブコントロール、ポジティブコントロール、サンプルの核酸 5μl を上記 PRC 反応チューブにそれぞれ加え、8000rpm で数秒間遠心分離し、蛍光定量 PCR アンプに入れます。
3. qRT-PCR増幅
3.1 蛍光シグナルチャンネル: プローブ検出モードは次のように設定されます: Reporter Dye1: FAM、および Quencher Dye: NONE。
3.2 反応条件は次のように設定するものとします。
増幅のパラメータ | |||
システム | 総量は25μlです | ||
PCRの反応条件 | 段階 | 条件 | サイクル |
UNG プロセス | 37℃ 2分 | 1 | |
変性前 | 95℃ 30秒 | 1 | |
PCR | 95℃ 10秒 |
40 | |
60℃ 30秒 で蛍光シグナルを収集するように設定します。 このフェーズの終わり | |||
【結果の解釈】
1. 妥当性の判断：
1.1 ポジティブコントロール: FAM チャネルの Ct 値 ≤ 32、および増幅曲線は顕著な指数関数的増殖期を示します。
1.2 ネガティブコントロール: FAMチャンネルには増幅曲線がないか、増幅曲線が直線またはわずかに斜めになっています。
2. テスト結果の判定:
検査サンプルの FAM 検出チャンネルが 増幅曲線なし、次のように決定できます。 PMB ネガティブ。
FAM 検出チャネルの増幅曲線が指数関数的に増加し、Ct 値が ≤ 36、次のように決定できます。 PMB ポジティブ.
36 サンプルは次のように考慮する必要があります 疑わしい結果、確認のために分析を繰り返す必要があります。
【予防】
1. 検査室の管理は、PCR 遺伝子増幅検査室の管理規定に厳密に従って行わなければなりません。研究所の職員は専門的な訓練を受けていなければなりません。実験プロセスは厳密に異なるエリア (試薬調製エリア、検体調製エリア、増幅および生成物分析エリア) で実施されます。すべての消耗品は滅菌後に使い捨てとします。実験操作の各段階での特別な装置、機器、および消耗品は、相互に使用してはならない。
2. 試薬および検体調製段階のために生物学的安全キャビネットを準備してください。白衣、使い捨て手袋、ピペットは実験中に使用するものとする。
3. 試薬の凍結融解を繰り返すことはできる限り避けてください。使用前に試薬を完全に解凍し、8000rpm で数秒間遠心分離します。
4. 検体調製エリアで使用したピペットは消毒剤の入った容器に入れ、滅菌後廃液と一緒に捨ててください。
5. 実験後、作業台とピペットは 10% 次亜塩素酸塩または 75% アルコールまたは紫外線ランプで処理するものとします。
【製造】
名前： 山東新達遺伝子技術有限公司
Shandong Sinder Technology Co., Ltd の子会社
住所: 山東省諸城市順興路八島会谷工業団地B2棟
郵便番号: 262233
電話: +86 - 0532 5882 0810
【商品名】パラ結核菌リアルタイム PCR 検出キット
【パッケージ】50 テスト
【表示】パラ結核菌用リアルタイム PCR 検出キットは、鼻腔スワブ、牛乳、関節液サンプル中のパラ結核菌 RNA の検出に適用できます。検査結果は研究のみを目的としており、臨床診断を目的としたものではありません。
【主なコンポーネントと内容】
名前 | 仕様 | 量 |
PMB反応液 | 1000μl/チューブ | 1 |
PMB ポジティブコントロール | 250μl/チューブ | 1 |
ネガティブコントロール | 250μl/チューブ | 1 |
【保管と有効期限】
-20±5℃で保管、冷凍・解凍を3回以内繰り返した場合、賞味期限は12ヶ月です。
【試験方法】
1. 核酸抽出
核酸抽出は市販のRNA抽出キットをご利用いただけますので、キットの説明書に従ってください。
2. PCR 増幅 (ABI 7500 の例、ABI 7300 および LC480 については、この操作およびマニュアルを参照してください。)
2.1 検査サンプルの数を計算し、n+2 PCR 反応チューブを取り出し、2 を追加します。各チューブに 0μl の反応溶液を加えます。
2.2 ネガティブコントロール、ポジティブコントロール、サンプルの核酸 5μl を上記 PRC 反応チューブにそれぞれ加え、8000rpm で数秒間遠心分離し、蛍光定量 PCR アンプに入れます。
3. qRT-PCR増幅
3.1 蛍光シグナルチャンネル: プローブ検出モードは次のように設定されます: Reporter Dye1: FAM、および Quencher Dye: NONE。
3.2 反応条件は次のように設定するものとします。
増幅のパラメータ | |||
システム | 総量は25μlです | ||
PCRの反応条件 | 段階 | 条件 | サイクル |
UNG プロセス | 37℃ 2分 | 1 | |
変性前 | 95℃ 30秒 | 1 | |
PCR | 95℃ 10秒 |
40 | |
60℃ 30秒 で蛍光シグナルを収集するように設定します。 このフェーズの終わり | |||
【結果の解釈】
1. 妥当性の判断：
1.1 ポジティブコントロール: FAM チャネルの Ct 値 ≤ 32、および増幅曲線は顕著な指数関数的増殖期を示します。
1.2 ネガティブコントロール: FAMチャンネルには増幅曲線がないか、増幅曲線が直線またはわずかに斜めになっています。
2. テスト結果の判定:
検査サンプルの FAM 検出チャンネルが 増幅曲線なし、次のように決定できます。 PMB ネガティブ。
FAM 検出チャネルの増幅曲線が指数関数的に増加し、Ct 値が ≤ 36、次のように決定できます。 PMB ポジティブ.
36 サンプルは次のように考慮する必要があります 疑わしい結果、確認のために分析を繰り返す必要があります。
【予防】
1. 検査室の管理は、PCR 遺伝子増幅検査室の管理規定に厳密に従って行わなければなりません。研究所の職員は専門的な訓練を受けていなければなりません。実験プロセスは厳密に異なるエリア (試薬調製エリア、検体調製エリア、増幅および生成物分析エリア) で実施されます。すべての消耗品は滅菌後に使い捨てとします。実験操作の各段階での特別な装置、機器、および消耗品は、相互に使用してはならない。
2. 試薬および検体調製段階のために生物学的安全キャビネットを準備してください。白衣、使い捨て手袋、ピペットは実験中に使用するものとする。
3. 試薬の凍結融解を繰り返すことはできる限り避けてください。使用前に試薬を完全に解凍し、8000rpm で数秒間遠心分離します。
4. 検体調製エリアで使用したピペットは消毒剤の入った容器に入れ、滅菌後廃液と一緒に捨ててください。
5. 実験後、作業台とピペットは 10% 次亜塩素酸塩または 75% アルコールまたは紫外線ランプで処理するものとします。
【製造】
名前： 山東新達遺伝子技術有限公司
Shandong Sinder Technology Co., Ltd の子会社
住所: 山東省諸城市順興路八島会谷工業団地B2棟
郵便番号: 262233
電話: +86 - 0532 5882 0810
