鳥インフルエンザウイルスH5/H7/H9/一般サブタイプRNA検出キット(PCR-蛍光プローブ)
【商品名】
鳥インフルエンザウイルスH5/H7/H9/一般サブタイプ用リアルタイムPCR検出キット
【パッケージ】
50キット/箱
【主な成分と含有量】
名前 | 仕様 | 量 |
H5/H7/H9/一般三価反応液 | 1250μl/チューブ | 1 |
H5/H7/H9/一般ポジティブコントロール | 250μl/チューブ | 1 |
ネガティブコントロール | 250μl/チューブ | 1 |
【保管と賞味期限】
-20±5℃で保管、凍結融解を3回以内繰り返した場合、賞味期限は12ヶ月です。
【モデル】
ABI 7500、ABI QuantStudio 5、CFX Connect、CFX Opus 96、LightCycle480、Gentiter 96E/96R、LineGene 9600 Plus、およびその他の蛍光定量 PCR アンプ。
【試験方法】
1. 核酸抽出
核酸抽出は市販のRNA抽出キットをご利用いただけますので、キットの説明書に従ってください。
2. PCR増幅
2.1 試験サンプルの数を計算し、n+2 PCR 反応チューブを取り、各チューブに 25μl の反応溶液を加えます。
2.2 5μlを追加 ネガティブコントロール、ポジティブコントロールの核酸、サンプルをそれぞれ上記のPCR反応チューブに入れ、8000rpmで数秒間遠心分離し、蛍光定量PCRアンプに入れます。
2.3 反応条件は次のように設定します。
アンプの関連パラメータ | |||
システム | 総量: 30μl | ||
信号収集
| 鳥インフルエンザ H5/H7/H9/一般
| H5 サブタイプ - HEX チャネルが蛍光シグナルを収集します | |
H7 サブタイプ - FAM チャネルが蛍光シグナルを収集します | |||
H9 サブタイプ - Cy5 チャネルが蛍光シグナルを収集します | |||
一般 - ROX チャネルは蛍光シグナルを収集します | |||
PCR反応条件
| ステージ | Condition | サイクル数 |
逆転写 | 55℃:15分 | 1 | |
前退化 | 95℃:30秒 | 1 | |
PCR
| 95℃:10秒 |
40
| |
56℃:30秒 (この段階の最後に蛍光シグナルを収集するように設定します) |
【結果の解釈】
1. 検査キットの有効性の判定:
(1) 弱いポジティブコントロール: FAM、HEX、Cy5、ROX チャネルの Ct 値 ≤ 32、明らかな指数関数的位相を伴う増幅曲線。
(2) ブランクコントロール: FAM、HEX、Cy5、および ROX チャネルには増幅曲線がないか、増幅曲線が直線またはわずかに斜めで、顕著な指数関数的位相がなく、Ct 値 ≥ 38 または Ct 値がありません。
2. 結果の判定:
結果判定 | FAMチャンネル | 16 進チャネル | Cy5チャネル | ROXチャンネル |
鳥インフルエンザウイルスH5サブタイプ核酸陽性 | - | + | - | + |
鳥インフルエンザウイルスH7サブタイプ核酸陽性 | + | - | - | + |
鳥インフルエンザウイルスH9サブタイプ核酸陽性 | - | - | + | + |
鳥インフルエンザウイルス H5/H7 核酸サブタイプ酸陽性 | + | + | - | + |
鳥インフルエンザウイルス H5/H9 核酸サブタイプ酸陽性 | - | + | + | + |
鳥インフルエンザウイルス H7/H9 核酸サブタイプ酸陽性 | + | - | + | + |
鳥インフルエンザウイルス H5/H7/H9 核酸サブタイプ酸陽性 | + | + | + | + |
低病原性鳥インフルエンザウイルス核酸陽性 | - | - | - | + |
鳥インフルエンザウイルス核酸陰性 | - | - | - | - |
*ノート:
(1) 対数増殖期増幅曲線があり、Ct値≦36の場合+と判定します。増幅曲線がない場合、またはCt値>36の場合は-と判定します。36 < Ct 値 <40 の場合、サンプルは疑わしいため、再検査する必要があります。
(2) H5/H7/H9 サブタイプの結果が + で ROX チャネルが - の場合は、再テストする必要があります。
【予防】
1. 検査室の管理は、PCR 遺伝子増幅検査室の管理仕様書に厳密に従って行わなければなりません。研究所の職員は専門的な訓練を受けていなければなりません。実験プロセスは厳密に異なるエリア (試薬調製エリア、検体調製エリア、増幅および生成物分析エリア) で実施されます。すべての消耗品は滅菌後に使い捨てとします。実験操作の各段階での特別な装置、機器、および消耗品は、相互に使用してはならない。
2. 試薬および検体調製段階のために生物学的安全キャビネットを準備してください。実験中は、白衣、使い捨て手袋、ピペッターを使用します。
3. 試薬の凍結融解を繰り返すことはできる限り避けてください。使用前に試薬を完全に解凍し、8000rpm で数秒間遠心分離します。
4. 検体調製エリアで使用したピペットは消毒剤の入った容器に入れ、滅菌後廃棄物と一緒に捨ててください。
5. 実験後、作業台とピペッターを 10% 次亜塩素酸塩または 75% アルコールまたは紫外線ランプで処理しました。
【製造】
名前: 山東新達遺伝子技術有限公司
Shandong Sinder Technology Co., Ltd の子会社
住所: 山東省諸城市順興路八道会谷工業団地B2棟
郵便番号: 262233
電話: +86 - 0532 5882 0810
鳥インフルエンザウイルスH5/H7/H9/一般サブタイプRNA検出キット(PCR-蛍光プローブ)
【商品名】
鳥インフルエンザウイルスH5/H7/H9/一般サブタイプ用リアルタイムPCR検出キット
【パッケージ】
50キット/箱
【主な成分と含有量】
名前 | 仕様 | 量 |
H5/H7/H9/一般三価反応液 | 1250μl/チューブ | 1 |
H5/H7/H9/一般ポジティブコントロール | 250μl/チューブ | 1 |
ネガティブコントロール | 250μl/チューブ | 1 |
【保管と賞味期限】
-20±5℃で保管、凍結融解を3回以内繰り返した場合、賞味期限は12ヶ月です。
【モデル】
ABI 7500、ABI QuantStudio 5、CFX Connect、CFX Opus 96、LightCycle480、Gentiter 96E/96R、LineGene 9600 Plus、およびその他の蛍光定量 PCR アンプ。
【試験方法】
1. 核酸抽出
核酸抽出は市販のRNA抽出キットをご利用いただけますので、キットの説明書に従ってください。
2. PCR増幅
2.1 試験サンプルの数を計算し、n+2 PCR 反応チューブを取り、各チューブに 25μl の反応溶液を加えます。
2.2 5μlを追加 ネガティブコントロール、ポジティブコントロールの核酸、サンプルをそれぞれ上記のPCR反応チューブに入れ、8000rpmで数秒間遠心分離し、蛍光定量PCRアンプに入れます。
2.3 反応条件は次のように設定します。
アンプの関連パラメータ | |||
システム | 総量: 30μl | ||
信号収集
| 鳥インフルエンザ H5/H7/H9/一般
| H5 サブタイプ - HEX チャネルが蛍光シグナルを収集します | |
H7 サブタイプ - FAM チャネルが蛍光シグナルを収集します | |||
H9 サブタイプ - Cy5 チャネルが蛍光シグナルを収集します | |||
一般 - ROX チャネルは蛍光シグナルを収集します | |||
PCR反応条件
| ステージ | Condition | サイクル数 |
逆転写 | 55℃:15分 | 1 | |
前退化 | 95℃:30秒 | 1 | |
PCR
| 95℃:10秒 |
40
| |
56℃:30秒 (この段階の最後に蛍光シグナルを収集するように設定します) |
【結果の解釈】
1. 検査キットの有効性の判定:
(1) 弱いポジティブコントロール: FAM、HEX、Cy5、ROX チャネルの Ct 値 ≤ 32、明らかな指数関数的位相を伴う増幅曲線。
(2) ブランクコントロール: FAM、HEX、Cy5、および ROX チャネルには増幅曲線がないか、増幅曲線が直線またはわずかに斜めで、顕著な指数関数的位相がなく、Ct 値 ≥ 38 または Ct 値がありません。
2. 結果の判定:
結果判定 | FAMチャンネル | 16 進チャネル | Cy5チャネル | ROXチャンネル |
鳥インフルエンザウイルスH5サブタイプ核酸陽性 | - | + | - | + |
鳥インフルエンザウイルスH7サブタイプ核酸陽性 | + | - | - | + |
鳥インフルエンザウイルスH9サブタイプ核酸陽性 | - | - | + | + |
鳥インフルエンザウイルス H5/H7 核酸サブタイプ酸陽性 | + | + | - | + |
鳥インフルエンザウイルス H5/H9 核酸サブタイプ酸陽性 | - | + | + | + |
鳥インフルエンザウイルス H7/H9 核酸サブタイプ酸陽性 | + | - | + | + |
鳥インフルエンザウイルス H5/H7/H9 核酸サブタイプ酸陽性 | + | + | + | + |
低病原性鳥インフルエンザウイルス核酸陽性 | - | - | - | + |
鳥インフルエンザウイルス核酸陰性 | - | - | - | - |
*ノート:
(1) 対数増殖期増幅曲線があり、Ct値≦36の場合+と判定します。増幅曲線がない場合、またはCt値>36の場合は-と判定します。36 < Ct 値 <40 の場合、サンプルは疑わしいため、再検査する必要があります。
(2) H5/H7/H9 サブタイプの結果が + で ROX チャネルが - の場合は、再テストする必要があります。
【予防】
1. 検査室の管理は、PCR 遺伝子増幅検査室の管理仕様書に厳密に従って行わなければなりません。研究所の職員は専門的な訓練を受けていなければなりません。実験プロセスは厳密に異なるエリア (試薬調製エリア、検体調製エリア、増幅および生成物分析エリア) で実施されます。すべての消耗品は滅菌後に使い捨てとします。実験操作の各段階での特別な装置、機器、および消耗品は、相互に使用してはならない。
2. 試薬および検体調製段階のために生物学的安全キャビネットを準備してください。実験中は、白衣、使い捨て手袋、ピペッターを使用します。
3. 試薬の凍結融解を繰り返すことはできる限り避けてください。使用前に試薬を完全に解凍し、8000rpm で数秒間遠心分離します。
4. 検体調製エリアで使用したピペットは消毒剤の入った容器に入れ、滅菌後廃棄物と一緒に捨ててください。
5. 実験後、作業台とピペッターを 10% 次亜塩素酸塩または 75% アルコールまたは紫外線ランプで処理しました。
【製造】
名前: 山東新達遺伝子技術有限公司
Shandong Sinder Technology Co., Ltd の子会社
住所: 山東省諸城市順興路八道会谷工業団地B2棟
郵便番号: 262233
電話: +86 - 0532 5882 0810